生物、医药和医疗器械技术

本发明公开了一种霉菌的培养方法、破壁方法，包括①在研磨容器中加入第一CTAB抽提液，将研磨容器进行冷冻，并使第一CTAB抽提液变为冰冻态；②在冷冻之后的研磨容器中加入霉菌及第二CTAB抽提液；以及③对霉菌进行研磨以破坏霉菌的细胞壁，并与第一CTAB抽提液及第二CTAB抽提液形成第一混合溶液等步骤；本发明还公开了一种相应的霉菌DNA的提取方法，包括在第一混合溶液中加入质量体积浓度为10%的SDS溶液，进行温浴，形成第二混合溶液；将第二混合溶液离心，得到第一上清液，第一上清液中含有霉菌的DNA；以及在第一上清液中加入苯酚‑氯仿‑异戊醇抽提液，混匀后离心，得到第二上清液，第二上清液中含有霉菌的DNA。本发明适用于对霉菌进行培养、破壁和DNA提取。

霉菌俗称丝状真菌，由于霉菌的种类繁多，仅依靠形态鉴定并不能准确地鉴定其种类，所以对霉菌进行分子水平的鉴定至关重要，而提取高质量的DNA是霉菌进行分子水平鉴定的基础。且因为霉菌的细胞壁包括β-葡聚糖、糖蛋白、几丁质微纤维三层结构，因此使得霉菌的细胞壁不易破碎。传统的霉菌DNA提取方法，往往存在对霉菌DNA的提取量少，且提取的DNA不完整的问题。

本发明由于采用了上述的技术方案，其与现有技术相比，所取得的技术进步在于：本发明所提供的霉菌的培养方法通过PDA培养基对霉菌活化2 3次。在适宜的温度和培~养基中培养得到的霉菌生长旺盛，菌丝体活性高，为下一步菌丝体的收集做好充分准备。所采用的PDA培养基具有营养成分均衡、配制简单的优点；
本发明所提供的霉菌的破壁方法，通过冷冻对研磨容器进行降温处理，并使第一CTAB抽提液变为冰冻态。在对霉菌进行研磨的过程中，经过降温的研磨容器以及冰冻态的第一CTAB抽提液的双重保障可以提供低温的研磨环境，使对霉菌的研磨处理在温度较低的环境下进行，从而能够最大程度的保证研磨之后的DNA 的完整性；
本发明所提供的霉菌DNA的提取方法具备前面所述的霉菌的破壁方法的优点，在此不再赘述，该霉菌DNA的提取方法同时还具有省时、经济等优点。