生物、医药和医疗器械技术

本发明涉及一种毕赤酵母定点DSB系统，构建步骤如下：构建site‑I‑SceI‑KanMX转化盒，利用诱导型启动子，电转化野生毕赤酵母GS115菌株，即得毕赤酵母定点DSB系统。本发明以毕赤酵母为载体，利用归位内切酶I‑SceI建立的定点DSB诱导系统，可以提高转化效率，同时细胞对其修复应答产生了Aneuploidy，与人肿瘤细胞中的Aneuploidy相似，可以作为一个研究定点DSB导致的Aneuploidy模型。

毕赤酵母（Pichia pastoris）定点DSB（DNA双链断裂）系统是一种基于CRISPR/Cas9或特异性核酸酶的基因编辑工具，可实现高效、精准的基因组修饰。其应用范围广泛，包括：（1）代谢工程——优化异源蛋白（如抗体、疫苗）表达，提高产量和活性；（2）合成生物学——构建人工通路生产高附加值化合物（如药物前体、生物燃料）；（3）基础研究——解析基因功能及调控机制。

毕赤酵母具有强启动子、高分泌能力和翻译后修饰优势，结合DSB系统可加速工业化菌株开发。随着基因编辑技术升级（如碱基编辑、Prime Editing），其精确度与效率将进一步提升，在生物制药、绿色制造等领域潜力巨大。但需优化递送效率、降低脱靶效应，并完善法规以适应规模化应用需求。