本发明通过对铁皮石斛外植体及各组培阶段的外源调节剂组合进行探讨，得出诱导铁皮石斛类原球茎最佳外植体为茎段，器官发生途径诱导类原球茎形成最佳培养基为：MS+6‑苄氨基腺嘌呤(6‑BA)0.1mg/L+萘乙酸(NAA)0.3mg/L+激动素(KT)0.3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L；愈伤组织途径诱导类原球茎形成最佳培养基为：MS+2,4‑D 0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L；通过对不同光周期诱导类原球茎情况进行探讨，发现采用光照7d后持续黑暗处理，茎段诱导的愈伤组织轻微发黄，分散性良好，易于分离，且显著降低褐化率，促进类原球茎的形成和生长；最佳的增殖分化培养基为：MS+萘乙酸(NAA)2.0mg/L+6‑苄氨基腺嘌呤(6‑BA)2.0mg/L，接种20d时，植株有明显的长高，茎段变粗且开始分节，叶片由嫩绿变为翠绿；接种45d后，多数植株茎粗壮，侧根较长，叶片翠绿，长势良好。可见，本发明提供了一种铁皮石斛组培快繁的方法，并且以茎段为外植体诱导类原球茎再生、丛生芽形成及生根培养成组培苗，解决了现有技术以种子为外植体，存在种子稀少、萌发率低、诱导率低、诱导周期长的问题，满足市场需求，为铁皮石斛规模化生产提供重要的技术支持。