生物、医药和医疗器械技术

本发明涉及分子生物学技术领域，特别涉及基因敲除质粒和细胞系，此细胞系感染PRV后，产生的IFN‑β mRNA水平，相比于PAM‑KNU细胞显著降低；此外，本细胞系促进PRV增殖，可以用于增殖PRV和PRV疫苗生产。

不包含POU结构域的八聚核苷酸结合蛋白（NONO, 也被称为P54nrb）是果蝇行为/人类剪接蛋白（DBHS）家族成员。人NONO基因编码471个氨基酸，其蛋白结构主要包含四个部分，N端串联的两个RNA识别基序（RRM1，RRM2），可识别RNA结合和剪接位点；C末端的卷曲螺旋结构域（Coiled coil），大约包含100个氨基酸；在RRM2和Coiled coil结构域之间存在一个保守结构域NOPS，包含52个氨基酸；在靠近C末端的位置存在一个螺旋‑转角‑螺旋（HTH）结构以及富含酸性/碱性氨基酸区域，这两个区域共同构成DNA结合域（DBD），能够结合双链DNA。

NONO蛋白是一种多功能蛋白，能够参与多种细胞内的生物学进程，NONO蛋白独立地或者协同其他转录因子，通过结合DNA或者RNA作用，参与转录调控以及mRNA的转运等过程；NONO蛋白可以通过结合RNA聚合酶II或者核酸外切酶等分子，调节mRNA的剪接；NONO蛋白的DNA结合结构域可以直接结合细胞核中损伤断裂的DNA，有助于双链DNA的精准和快速修复；在调节先天性免疫方面，NONO蛋白增强cGAS对于DNA的结合，促进IFN‑β的表达，抑制艾滋病毒的感染。

目前关于猪NONO（sNONO）蛋白的报道较少，为了更加深入地研究其功能，尤其是sNONO对于抗病毒免疫的影响，有必要开发一种从猪细胞基因组中敲除sNONO基因的方法，为后续开展猪NONO蛋白的相关研究奠定基础。

本发明的有益效果：

（1）本发明构建的sNONO KO‑PAM ‑KNU细胞系在感染PRV的条件下，明显降低IFN‑β的表达水平，能够应用于猪NONO调节先天性免疫机制的研究；

（2）通过PRV感染实验证明，在相同的条件下，本发明构建的sNONO KO‑PAM ‑KNU细胞系比PAM‑KNU细胞系更有利于PRV野生型以及疫苗株的增殖，所述细胞系可以应用于sNONO抗病毒作用研究以及PRV疫苗生产。