生物、医药和医疗器械技术

本发明提供了一种重组β‑半乳糖苷酶及其构建方法和应用，属于生物工程技术领域；本发明中构建了一种重组β—半乳糖苷酶β‑Gal‑LEH，通过将β‑Gal和ELP(VPGVG)50连接，构建出能够自我纯化且具稳定性好，水解乳糖效率高的重组β‑半乳糖苷酶β‑Gal‑LEH。

成果亮点

本发明旨在解决上述技术问题之一，为此，本发明提供了一种重组β-半乳糖苷酶及其构建方法和应用。 本发明首先提供了一种重组β-半乳糖苷酶β-Gal-LEH，所述β-Gal-LEH的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，对应的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。 上述重组β-半乳糖苷酶β-Gal-LEH通过如下方法构建，将β-Gal（Lactobacillus ***，登录号***）与ELP(VPGVG)50通过接头Linker连接，并且在ELP (VPGVG)50的C段增加6x-His标签，得到重组β-半乳糖苷酶β-Gal-Linker-ELP-6x-His，将其简称为β-Gal-LEH。

氧化物歧化酶（SOD）是一种广泛存在于动物、植物和微生物中的金属酶，它能催化清除超氧阴离子自由基，具有抗氧化、抗衰老等作用。下面是一种重组超氧化物歧化酶及其构建方法和应用的应用前景：

在化妆品领域，重组超氧化物歧化酶具有抗氧化性能和细胞穿膜性能的优点，能被开发成活力稳定、具有良好效果的化妆品。

在保健品领域，重组超氧化物歧化酶可以清除自由基，并抑制促炎细胞因子IL-6、IL-8和TNF-α释放，有望被开发成保健食品。

在药品领域，重组超氧化物歧化酶具有较高的稳定性和活性，有望被开发成具有治疗效果的药物。

总的来说，重组超氧化物歧化酶具有广阔的应用前景，但仍需要进一步的研究和开发来确定其具体的应用领域和效果。

本发明的优点：

本发明中，在β-半乳糖苷酶中连接了ELP (VPGVG)50，使β-半乳糖苷酶具有敏感且可逆的相变特性，在低于其临界温度时呈随机线圈形状，并且高度溶解；而当高于其临界温度的温度时，β-半乳糖苷酶将变得不溶，形成较大的微米级聚合物并能够被观察到；直至温度重新低于临界温度时，此时β-半乳糖苷酶在溶液中重新溶解。通过可逆相变的多次循环可以实现β-半乳糖苷酶的纯化，得到更高的纯化倍数，并获得具有更高的活性和稳定性的β-半乳糖苷酶。

本发明通过基因修饰技术构建了β-Gal-LEH重组β-半乳糖苷酶，在特定温度下，ELP表现出一种快速且热力学可逆的相变行为，ELP介导的纯化是一种廉价和高效的纯化形式，进而使重组β-半乳糖苷酶可以简单、快速、高效地自我纯化，这种快速而简单的纯化方式在效率上优于传统的镍柱亲和层析纯化方式，此外可以提高β-Gal酶热和不同温度储存条件下的稳定性。

本发明中构建的重组β-Gal-LEH可以在更大的温度及pH范围内有效工作，有利于提高酶催化工艺的效率。本发明得到的融合蛋白更适合于生物催化工艺的应用，更能满足社会生产的要求，有广阔的市场前景。