生物、医药和医疗器械技术

本发明公开了鸡细小病毒和鸡新城疫病毒二重PCR检测方法的建立。本发明提供了成套引物，其由引物1至引物4组成。本试验所建ChPV 和NDV二重PCR方法可以用于临床ChPV和NDV的混合感染的快速检测，适于大批量检测，既可节约成本和节省时间，又能减少污染，具有很高的实用价值。

鸡细小病毒(Chincken parvovirus，ChPV)是引起鸡肠道疾病重要的病原体之一，可以引起鸡群出现以腹泻、精神抑郁、体温调节障碍、生长迟缓、增加饲料消耗等为特征的急性或慢性肠道性疾病、矮小综合症、营养不良综合症。在鸡群中普遍存在，主要侵害雏鸡，其中以商品肉鸡感染率较高，蛋鸡或种鸡次之。自2010年以来，北美、波兰、巴西、匈牙利、克罗地亚和南韩等国家相继暴发了该病，给养鸡业造成较大的经济损失。新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的一种多病型的急性、高度接触性传染病。当禽类感染NDV时，发病急，病情重，常出现高热、黏膜出血、呼吸困难及下痢等症状，且引起较高的死亡率。NDV由一条不分节段的单股负链RNA组成，包含NP、P、M、F、HN和L，共6种结构蛋白。目前，ND是影响养禽业发展的主要疾病，我国已将其列为一类动物疫病，也是我国规模化鸡场的常发病和多发病。而ChPV是养禽业中的一种新发传染病病毒，在世界范围内流行，ChPV和NDV引起的疾病给我国养禽业带来极大的经济损失，因此，建立一种快速检测ChPV与NDV的诊断方法十分必要。Zsak等根据ChPV NS1基因的保守序列，建立了ChPV的快速特异PCR检测方法；Carratalà等建立了检测ChPV的TaqMan探针荧光定量PCR；Finkler等根据ChPV NS1基因的保守序列建立了SYBR Green-based荧光定量PCR方法；奉彬等建立了检测ChPV半巢式PCR方法。明文龙等建立了鉴别NDV强弱毒一步RT-PCR；周小桐等建立了检测NDV的real-time RT-PCR。

本研究用建立的ChPV和NDV二重PCR方法对来自广西区内的50份病料进行检测，采用一步法扩增与ChPV和NDV二重PCR方法对临床病料分别进行了检测对比，结果两者的符合率为100％，检测结果表明，广西区内鸡群存在ChPV与NDV的混合感染，提示在鸡群养殖中应注意防制ChPV与NDV的混合感染。该方法可以在同一份样品中同时检测出两种病原体，符合临床上对多种疾病的同步诊断的要求，对于这两种病的鉴别诊断和混合感染检测具有重要的临床应用价值。本试验所建立的ChPV和NDV二重PCR方法可以用于临床ChPV和NDV的混合感染的快速检测，适于大批量检测，既可节约成本和节省时间，又能减少污染，具有很高的实用价值。