生物、医药和医疗器械技术

本发明公开了一种鉴定鸡细小病毒和禽呼肠孤病毒的引物组合及其应用。本发明的引物组合由引物对I和引物对II组成。引物对I由引物ChPV-F和ChPV-R组成。引物对II由引物ARV-F和ARV-R组成。本发明还保护所述引物组合在鉴别鸡细小病毒和禽呼肠孤病毒中的应用、鉴定待测病毒是否为鸡细小病毒或禽呼肠孤病毒中的应用、鉴定待测样本是否感染了鸡细小病毒和/或禽呼肠孤病毒中的应用。本发明建立的二重PCR可用于快速检测鸡细小病毒和禽呼肠孤病毒的混合感染，适于大批量检测，既可节约成本和节省时间，又能减少污染，具有很高的实用价值。

鸡细小病毒(Chincken parvovirus，ChPV)是一种单链DNA病毒，为引起鸡肠道疾病的主要病原体之一，可以引起以腹泻、精神抑郁、体温调节障碍、生长迟缓、增加饲料消耗等为特征的急性或慢性肠道性疾病、矮小综合症、营养不良综合症。ChPV在鸡群中普遍存在，主要侵害雏鸡，但以商品肉鸡感染率较高、蛋鸡或种鸡次之，给养鸡业造成巨大的经济损失。自2010年以来，北美、波兰、匈牙利、克罗地亚、南韩等国家相继暴发了该病，给养鸡业造成较大的经济损失。禽呼肠孤病毒(Avian reoviruses，ARV)是引起禽类法氏囊胸腺收缩、关节炎、骨骼异常发育、产蛋率下降以及营养吸收障碍综合征等疾病的一种双链RNA病毒，不同性别和日龄的鸡群均可感染。ChPV与ARV是危害养鸡业发展的主要病原，均能引起雏鸡肠道性疾病、矮小综合症以及营养吸收障碍综合征等疾病，因此建立一种ChPV与ARV快速鉴别诊断方法对养鸡业的健康发展具有重要意义。

目前，实验室诊断检测上述两种病原的方法以传统的病毒分离、琼脂扩散试验、间接荧光试验和酶联免疫吸附试验(ELISA)等为主，但这些检测方法存在耗时长、敏感性低、标准化难等缺点，在实际应用中具有一定的局限性，因此越来越多的学者致力于PCR检测方法。与常规PCR相比，多重PCR具有可同时检测、鉴别多种病原体的特点，在多种病原混合感染的鉴别诊断中具有独特的优势和很高的临床实用价值，但目前尚无可快速鉴别诊断ChPV与ARV的多重PCR检测方法。

目前，病毒的鉴定手段主要包括传统的病毒分离、琼脂扩散试验和ELISA等，但这些方法通常具有耗时、费力且敏感性不高等缺点，而PCR具有操作简便快速、特异性强、敏感性高、重复性好等优点。在临床检测中，常出现多种病原体混合感染，为了用于多种病原的鉴别诊断，迫切需要一种高通量、低成本、高效率的检测方法进行批量快速检测。二重(或多重)PCR采用多对引物同时扩增多个模板，克服了常规PCR的不足。但是，二重(或多重)PCR是在同一体系中存在多种模板和引物，复合扩增中引物之间、模板之间、引物与模板之间可能存在竞争抑制。因此试验中有必要对各种条件进行优化，需要防止引物与模板间的非特异性结合，避免出现非特性条带，同时要尽量避免产生引物二聚体。此外，目的片段要有合适的梯度，各引物退火条件尽可能一致，以确保两种(或多种)扩增产物量的相对平衡。本发明建立的二重PCR可用于快速检测ChPV和ARV的混合感染，适于大批量检测，既可节约成本和节省时间，又能减少污染，具有很高的实用价值。