生物、医药和医疗器械技术

本发明公开了一种鉴别8种猪病毒病的GeXP快速检测试剂盒及其引物组，发明人基于GeXP系统研究设计了九对特异性引物和一对通用引物，据此建立了同时鉴别8种猪病毒病的GeXP快速检测方法，并制备了相应的检测试剂盒。

H1、H3亚型猪流感病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与障碍综合征病毒、猪乙脑病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型是严重危害猪的8种主要传染性疾病。随着猪养殖业的发展，猪传染性病毒病的发病率也在逐渐升高，已成为限制养猪业发展的一大重要因素。鉴别诊断这些猪传染性疾病的传统方法，主要包括病原分离鉴定和血清学试验等，但这些方法常受临床病料新鲜度、污染程度或病程的限制，操作也十分繁琐、费时，对多重混合感染的鉴别诊断更为困难。近年来，随着分子生物学的发展，PCR技术已被广泛应用于猪传染病的检测并建立了多重PCR检测技术，可同时检测几种病原，但需几对引物组合在一起同时竞争地扩增，引物之间会产生相互干扰，多增加一对引物，敏感性就越低。同时，PCR产物需通过琼脂糖电泳才可观察结果，该电泳难以区分50bp-100bp以内的条带，一般只可做到2-4重PCR，难以达到高通量的检测。多重荧光PCR一般只检测到3重，由于探针要标记不同发光波长的荧光基团，如标记太多的荧光基团，相互会产生干扰，因此，也只能检测到2-4重。由于在多重PCR反应体系中同时存在几对引物，使得形成复杂引物二聚体的概率大大增加，同时检测的目的基因数量有限(多在2-4个基因)，使得多重PCR还达不到高通量快速检测和分析的目的。

针对目前缺乏对常见猪病毒病同时进行检测和诊断的有效可靠技术，发明人基于GeXP系统研究设计了九对特异性引物和一对通用引物，据此建立了同时鉴别8种猪病毒病的GeXP快速检测方法，并制备了相应的检测试剂盒。本发明具有特异性好、灵敏度高、方便高效等优点，应用本发明可同时检测和鉴别8种病原体，对H1亚型猪流感病毒、H3亚型猪流感病毒、伪狂犬病毒、猪瘟病毒、美洲型猪繁殖与障碍综合征病毒、猪乙脑病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型的特异性强，灵敏度分别为10拷贝/μl、10拷贝/μl、10拷贝/μl、1000拷贝/μl、100拷贝/μl、10拷贝/μl、100拷贝/μl、100拷贝/μl、100拷贝/μl，与病毒分离和血凝抑制实验等常规实验方法的鉴定结果相比，符合率达100％。本发明有效解决了多重PCR过程中的扩增偏爱性，为主要猪常见传染病及其病原体的检测提供了简便、高通量的检测手段，更符合实际的需要，应用前景广阔。