生物、医药和医疗器械技术

本发明公开了并成功建立可视化二重LAMP鉴别禽白血病病毒和鸡传染性贫血病毒的方法。本发明还提供可视化二重LAMP鉴别禽白血病病毒和鸡传染性贫血病毒的引物组。该方法可用于检测和鉴别禽白血病病毒和鸡传染性贫血病毒，适用于禽白血病病毒和鸡传染性贫血病毒的临床快速筛查。

目前我国鸡群中免疫抑制性病毒二重及多重感染的现象具有普遍性。禽白血病(Avian leukosis，AL)和鸡传染性贫血(Chicken Infectious Anemia,CIA)是两种鸡的免疫抑制病，CIAV、ALV单独感染或共感染时，能显著降低疫苗的免疫效果，这有可能造成鸡群不能有效抵抗病毒的感染而继发其他疾病，继而影响养殖业的健康和经济效益。王仙等研究表明国内鸡群普遍存在CIAV的感染，并且CIAV常常与ALV、马立克氏病病毒(MDV)、网状内皮增生症病毒(REV)等以共感染的方式流行，其中CIAV与ALV共感染的阳性率高达10.8％。此外，一些研究表明禽弱毒疫苗中存在CIAV和ALV的污染，这对养殖业安全健康的生产带来巨大的威胁。因而建立一种快速鉴别检测CIAV和ALV的方法，为CIAV和ALV的净化和控制提供技术支撑。

本发明尝试在不同病原体靶基因上的F1c和B1c引物之间设计带有不同荧光基团的探针，靶基因不断扩增导致探针不断裂解，阳性扩增产物在相应的发射波长通道内发光，根据不同颜色的荧光，能够准确的判定病原体，该方法具有以下特点：①特异性探针只与特异性模板发生特异性杂交，增加了反应的特异性，避免了假阳性②反应只需要60分钟，并可以在水浴锅完成反应，反应敏感高效；③不需开盖就能准确判定结果，污染小：本发明采用了两种荧光基团(FAM和CY5)，这两种荧光基团的发射波长不同，分别是520nm和670nm，本发明在完成反应后，只需要将反应管置于多色荧光系统内观察，在520nm通道下只能观察到ALV阳性反应管发出绿色荧光，而在670nm通道下也只观察到CIAV阳性反应管在呈红色荧光，两者互不干扰，并且其它病毒和阴性对照均不发光，因此能够准确判断结果。