生物、医药和医疗器械技术

本发明仅需一次RT-PCR反应就能同时检测鉴别鸡新城疫病毒和禽肺炎病毒两种病原体，具有特异性强、灵敏度高、成本低、效率高等优点；而且本发明在引物设计上利用扩增片段长度的不同可直接判定扩增结果，更简便、直观和实用。本方法最低能同时检出10pg 鸡新城疫病毒RNA和10pg禽肺炎病毒RNA，为早期诊断由这两种病毒引起的疫病提供快速准确的诊断技术。

鸡新城疫病毒（NDV）和禽肺炎病毒（Avian pneumovirus，APV）是危害养鸡业的两种主要病毒。禽肺炎病毒主要引起上呼吸道的症状，以喷嚏，眼结膜潮红，泪腺肿，头部出现皮下水肿，俗称肿头；产蛋鸡感染主要引起产蛋下降2%-40%，孵化率降低；随着病情的发展，还表现出神经症状。而新城疫病毒感染的鸡也会引起上呼吸道的症状，以咳嗽、呼吸啰音为主，严重时可引起大批死亡。两种病毒引起的呼吸道症状，在临床上有时很难区分，容易混淆。

PCR技术由于具有敏感性高、特异性好、快速简便等特点，已经走进临床诊断实验室并广泛应用于各种禽病病原体的检测，包括用于NDV和APV的检测。二重PCR是一种特殊的PCR形式，其突出特点是，一次PCR反应，能同时检测并鉴别出两种病原体，在临床上具有很高的应用价值。

本发明具有如下优点：

针对目前缺乏同时对鸡新城疫病毒和禽肺炎病毒进行区分鉴别检测和诊断的有效可靠的技术，发明人研究设计了两对特异性引物，据此建立了鸡新城疫病毒和禽肺炎病毒的的二重RT-PCR检测方法，并制备了相应的检测试剂盒。实验证明，应用本发明所提供的试剂盒仅需一次PCR反应就能同时检测和鉴别鸡新城疫病毒和禽肺炎病毒两种病原体，具有特异性强、灵敏度高、低成本、高效率等优点；而且本发明在引物设计上利用扩增片段长度的不同可直接判定扩增结果，更简便、直观和实用。本发明的待测样品可来自健康动物或死亡动物，可为RNA和/或DNA，最低能同时检出10pg鸡新城疫病毒RNA、10pg禽肺炎病毒RNA，这为由这两种病毒引起鸡的疾病（尤其是发病早期）提供了准确的诊断结果，对切断其传播途径有重要意义，具有广阔的应用前景，对养鸡业可持续发展有着重要的现实意义。