生物、医药和医疗器械技术

禽肺炎病毒（APV)主要引起鸡上呼吸道的症状，以喷嚏，眼结膜潮红，泪腺肿，明显的症状为头部出现皮下水肿，出现头部肿大。SYBR Green I 实时荧光定量RT-PCR技术具有操作简便、结果直观、敏感性高、特异性强、重复性好等优点。建立一种SYBR Green I 实时荧光定量RT-PCR技术检测APV，能特异检测APV，检测的限量为10个拷贝的APV。

禽肺炎病毒（avian pneumovirus，APV）是禽偏肺炎病毒属的成员，属于禽副黏病毒科，该病毒主要危害火鸡，但是近几年发现这种病毒也侵害不同品种的鸡，包括种鸡、商品肉鸡和鸡蛋，引起这些鸡发病。该病毒引起鸡发病的日龄一般在4-7周龄，在5-6周龄时最易发生。主要引起上呼吸道的症状，以喷嚏，眼结膜潮红，泪腺肿，明显的症状为头部出现皮下水肿，出现头部肿大；产蛋鸡感染该病毒主要引起产蛋下降，下降幅度在2%-40%之间，种蛋孵化率降低；随着病情的发展，会出神经症状；该病引起的发病率在1%-90%之间，引起鸡死亡率在1%-20%，如继发其它疾病的感染，引起的死亡会更大，对养禽业造成的危害极大。

禽肺炎病毒基因组为不分节段的负链RNA，长度约为14kb，根据其核苷酸和氨基酸序列可以将其经典的分为A、B、C、D等4个亚型，其中A亚型和B亚型呈世界范围内广泛流行，C亚型于1997年在美国科罗拉多分离，D亚型仅存在于法国。其基因组编码有8种蛋白，即N-P-M-F-M2-SH-G-L。其中F为融合蛋白，是该病毒主要抗原结构蛋白，具有吸附作用。

本发明具有如下优点：

1）检测时间短

本发明通过Primer Express3.0软件，设计扩增禽肺炎病毒的引物，通过比对分析设计的引物之间的二聚体、发夹结构等，最终设计出了1对引物。建立了禽肺炎病毒的SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR方法。该方法无需进行电泳，仅需要约30分钟的时间完成扩增，并且可以直接通过电脑来观察反应结果，而常规的RT-PCR方法起码需要3.5小时来完成扩增反应，然后需要花2小时进行凝胶电泳来观察结果。

2）检测敏感性高

建立的SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR方法对样品中禽肺炎病毒的含量进行定量，其检测的灵敏度非常高，能检测到限量为10个拷贝的禽肺炎病毒质粒，常规PCR为1000个拷贝，检测结果比常规PCR方法敏感。用该的技术建立的试剂盒可用于禽肺炎病毒的鉴别检测，对禽肺炎病毒的准确诊断和预防有重要意义。

3）检测简便，价格相对较低

采用SYBR Green I实时建立的荧光定量PCR方法，是在缓冲液中加入SYBR Green I结合扩增时出现的双链，达到检测的目的。在扩增时形成的引物二聚体会影响检测结果，因此要进行溶解曲线分析，对扩增条件进行优化，消除引物二聚体的产生。采用SYBR Green I荧光染料的方法，要比Taqman探针方法简便，价格相对较低。