生物、医药和医疗器械技术

构建一种用于检测禽呼肠孤病毒(ARV)的新型电化学免疫传感器。所建立的方法仅对 ARV的检测为阳性，而对非目标禽流感（H5N1、H3N6 和 H9N2 亚型）、NDV、LTV、IBV 和 IBDV的检测为阴性。敏感性结果表明，所构建的 ARV 电化学免疫传感器，具有很高的敏感性，对 ARV 检测的敏感性达 101.5 TCID50/mL。使用建立的 ARV 电化学免疫传感器对 22 份临床样品进行检测，结果与病毒分离方法相符。

禽呼肠孤病毒(Avian reovirus，ARV)是呼肠孤病毒科、正呼肠孤病毒属的成员，可感染鸡、火鸡、鸭、鹅及其它野鸟，引起病毒性关节炎、呼吸道疾病、肠道疾病、中枢神经症状和免疫抑制等多种疾病。

目前检测ARV的主要方法有ELISA、RT-PCR、半套式RT-PCR、核酸探针技术。

电化学免疫传感器是将免疫测定法与高灵敏的电化学传感技术相结合而构建的一类新型生物传感器，可用于痕量免疫原性物质的分析检测，具有很强的专一性。其工作原理和传统的免疫测试法相似，都属于固相免疫测试法，即把抗原或抗体固定在传感器表面，通过传感技术将抗原抗体发生的免疫反应转变成可检测的电化学信号来测定样品中的目标物质。

本发明的实验证明，本发明具有如下优点：

1）本发明制备了一种新的石墨烯-甲壳胺-银纳米粒子复合物，且将其与禽呼肠孤病毒抗体复合，得到抗体-石墨烯-甲壳胺-银纳米粒子复合物（探针），将其作为电化学免疫传感器分析检测的示踪标记物可实现信号放大，大大的提高检测的灵敏度，并且该传感器不需要在测试底液中加入电化学活性物质，只需要简单的KCl溶液作为测试底液即可完成电化学检测；

2）利用石墨烯-甲壳胺-金纳米粒子复合物对金电极进行修饰，其大的比表面积和好的生物相容性为下一步的样品固定奠定良好的界面，并且其好的导电性为最后的电化学检测呼肠孤病毒提供充足的电子传递通道；

3）相对现有的电化学免疫传感器，本发明的免疫传感器还有一大突破：一般的传感器固定敏感界面之后会固定探针，用于捕获待测样品中的目标物质，通常固定在电极表面的探针在4℃下只能保存一个月，有效时间较短，很大程度上限制了免疫传感器在实际中的应用。而本发明突破了常规的思路，在固定石墨烯-甲壳胺-金纳米粒子复合物作为传感器的敏感界面后，直接滴涂待测样品，然后再与抗体-石墨烯-甲壳胺-银纳米粒子复合物探针反应，这样既可以保证了传感器特异性的前提下，提高了传感器的有效保存时间。