生物、医药和医疗器械技术

本发明的目的是提供一种鉴定或辅助鉴定鸡免疫抑制病病原体的GeXP快速检测的试剂或试剂盒，含有如下八种PCR引物对：鉴定或辅助鉴定鸡马立克病病毒的PCR引物对A，鉴定或辅助鉴定A亚群禽白血病病毒的PCR引物对B ，鉴定或辅助鉴定B亚群禽白血病病毒的PCR引物对C，鉴定或辅助鉴定J亚群禽白血病病毒的PCR引物对D，鉴定或辅助鉴定禽网状内皮组织增生症病毒的PCR引物对E，鉴定或辅助鉴定鸡呼肠孤病毒的PCR引物对F、鉴定或辅助鉴定鸡传染性贫血病毒的PCR引物对G，鉴定或辅助鉴定传染性法氏囊炎病毒的PCR引物对H。

鸡马立克氏病病毒、A、B和J亚群禽白血病病毒、禽网状内皮组织增生症病毒、禽呼肠孤病毒、鸡传染性贫血病毒和传染性法氏囊炎病毒均为传染性的可导致鸡免疫抑制的病毒。鸡感染鸡马立克氏病病毒、A、B和J亚群禽白血病病毒和禽网状内皮组织增生症病毒后可引起病鸡发生肿瘤，且也可引起终身的免疫抑制。鸡感染禽呼肠孤病毒、鸡传染性贫血病毒和传染性法氏囊炎病毒后也能长时间的抑制鸡的免疫功能。鸡感染这些病毒以后，免疫功能受到抑制，注射疫苗后抗体产生迟缓，抗体水平低，容易继发感染其他细菌性疾病，鸡生长缓慢，是阻碍养鸡行业发展的重要因素。

鉴别诊断这些鸡免疫抑制病的传统方法，主要包括病原分离鉴定和血清学试验等，但这些方法常受临床病材料新鲜度、污染程度或病程等因素的限制，操作也十分繁琐、费时，对多重混合感染的鉴别诊断就更为困难。近年来，随着分子生物学的发展，PCR技术已被广泛应用于这些鸡传染病的检测，并建立了多重PCR检测技术，同时检测几种病原，但需几对引物组合在一起同时竞争的扩增，引物之间会产生相互干扰，多增加一对引物，敏感性就越低。PCR产物需通过琼脂糖电泳才可观察结果，该电泳难以区分50bp-100bp以内的条带，一般只可做到2-4重PCR，难以达到高通量的检测。多重荧光PCR一般只检测到3重，由于探针要标记不同发光波长的荧光基团，如标记太多的荧光基团，相互会产生干扰，因此，也只能检测到2-4重。由于在多重PCR反应体系中同时存在几对引物，使得形成复杂引物二聚体的概率大大增加，同时检测的目的基因数量有限(多在2-4个基因)，使得多重PCR还达不到高通量快速检测和分析的目的。

本发明提供了一种同时鉴别8种鸡传染性免疫抑制病病原体的GeXP快速检测试剂盒和检测方法。该试剂盒是基于GeXP系统使用的，包含8对PCR引物，检测结果表明，该试剂盒特异性强，灵敏度高，可以用于同时鉴别检测鸡马立克氏病病毒、A、B和J亚群禽白血病病毒、禽网状内皮组织增生症病毒、禽呼肠孤病毒、鸡传染性贫血病毒和传染性法氏囊炎病毒。