生物、医药和医疗器械技术

本发明公开了一种包拉米虫LAMP检测试剂盒。本发明提供了检测包拉米虫的环介导等温扩增引物组，包括引物1、引物2、引物3和引物4；所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的核苷酸序列分别依次为序列表中的序列1、序列2、序列3和序列4。本发明的实验证明，本发明MDPV的保守序列设计了针对8个特异区域的6条引物，用其进行LAMP检测，具有比常规检测方法更特异、更敏感的特点，仅需使用一台能控温的水浴锅，并且结果可以无需仪器而仅通过肉眼判定，适合在基层兽医站和养殖场中进行快速检测，具有较好的应用前景。

包拉米虫（Bonamia）是影响世界贝类养殖业发展的主要病原，所有种类的贝类和其余贝类科的贝类都被认为有易感性，主要寄生在血淋巴细胞内，能造成较大的死亡率。包拉米虫病（Bonamiasis）因为包拉米虫的高致病性和广阔的地理分布，为OIE规定的必报水生动物疫病之一。

传统的检测方法，需要使用昂贵的仪器和试剂等。而环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是由Notomi等于2000年建立的一种新型核酸扩增技术，该技术具有操作简便、反应快速、成本低廉和结果可视化等优点，目前在一些病原微生物的检测中被广泛运用。

目前，国内外均未见有建立Bonamia LAMP可视化检测试剂盒和方法的相关报道。

本发明的实验证明，本发明MDPV的保守序列设计了针对8个特异区域的6条引物，使扩增反应具有很高的特异性，在内引物之间增加两条环引物提高了扩增效率，缩短了LAMP的反应时间。通过优化反应条件后，建立了的LAMP检测方法。所建立的BonamiaLAMP检测方法只需要在62-64℃的水浴锅中反应50分钟即可完成，能特异的检测Bonamia，并且检测的灵敏度非常高，能检测到15.4fg的Bonamia DNA样品，灵敏度是常规PCR的10倍。总之，本发明的引物和方法，具有比常规检测方法更特异、更敏感的特点，仅需使用一台能控温的水浴锅，并且结果可以无需仪器而仅通过肉眼判定，适合在基层水产兽医站和养殖场中进行快速检测，具有较好的应用前景。