生物、医药和医疗器械技术

本发明公开了同时鉴别β‑内酰胺类抗生素耐药基因的GeXP多重PCR检测引物组，包括四对引物对：引物对A、引物对B、引物对C和引物对D，它们分别针对β‑内酰胺类抗生素耐药基因TEM、CTX‑M、SHV和bla‑CMY。在此基础上，发明人进一步建立了相应GeXP快速检测方法及其试剂盒。实验证明，使用本发明可同时检测β‑内酰胺类耐药基因TEM、CTX‑M、SHV和/bla‑CMY，具有简便快速、特异性强、灵敏度高等特点，与药敏试验、测序等实验方法的鉴定结果相比，符合率达100％。因此，本发明为常见的β‑内酰胺类耐药基因的检测提供了简便、高通量的检测试剂盒和检测体系，更符合实际的需要。本发明研究从基因上了解广西地区细菌对β‑内酰胺类抗生素的耐药情况，为调查耐药基因流行趋势提供一种全新的技术手段，应用前景广阔。

抗生素的发明和应用是人类在20世纪医药领域最伟大的成就之一。由于广谱抗菌药 的滥用，细菌耐药性的产生，给人类又造成了新的灾难。随着动物养殖业向规模化、集约 化方法发展，饲养密度提高，加上管理用药不合理，导致动物细菌性疾病的危害加重。动 物源食品也随之受到污染。近年来，由食源性致病菌引起的食物中毒在世界各地均有报道， 引发公共卫生安全问题。细菌耐药性是微生物对抗生素的一种自然反应，每一种抗生素进 入临床用药后随之而来的是细菌的耐药，这种耐药可能是天然的，也可能通过变异或者基 因转移获得，不同的抗生素有其主导的耐药机制。细菌耐药带来的问题日愈严重，随着分 子生物学技术的发展，细菌耐药性相关耐药基因陆续被鉴定。因此，要控制细菌耐药性， 不仅要合理使用抗生素，还应该建立细菌耐药性相关耐药基因监测网，准确系统连续地检 测本地细菌耐药情况，从而做好耐药趋势的追踪和控制。

据此，结合GeXP多重基因表达系统，发明人设计并合成了同时鉴别β‑内酰胺类抗生 素耐药基因的GeXP多重PCR检测引物组，包括四对引物对：引物对A、引物对B、引物对 C和引物对D，它们分别针对β‑内酰胺类抗生素耐药基因TEM、CTX‑M、SHV和bla‑CMY； 每对引物包括上游引物和下游引物，每条引物由特异性嵌合引物在5’端添加相应GeXP通 用引物构成；特异性嵌合引物分别具有序列表中SEQ.ID.NO.9至SEQ.ID.NO.16的碱基序 列。在此基础上，发明人进一步建立了相应GeXP快速检测方法及其试剂盒。实验证明， 使用本发明可同时检测β‑内酰胺类耐药基因TEM、CTX‑M、SHV和/bla‑CMY，具有简便快 速、特异性强、灵敏度高等特点，其灵敏度分别为10拷贝/μl、100拷贝/μl、10拷贝 /μl和100拷贝/μl，与药敏试验、测序等实验方法的鉴定结果相比，符合率达100％。 因此，本发明为常见的β‑内酰胺类耐药基因的检测提供了简便、高通量的检测试剂盒和 检测体系，更符合实际的需要。本发明研究从基因上了解广西地区细菌对β‑内酰胺类抗 生素的耐药情况，为调查耐药基因流行趋势提供一种全新的技术手段，应用前景广阔。