生物、医药和医疗器械技术

本发明公开了同时鉴别磺胺类抗生素耐药基因的GeXP多重PCR检测引物组，包括三对引物对：引物对A、引物对B和引物对C，它们分别针对磺胺类抗生素耐药基因SulⅠ、SulⅡ和SulⅢ。在此基础上，发明人进一步建立了相应GeXP快速检测方法及其试剂盒。实验证明，使用本发明可同时检测磺胺类耐药基因SulⅠ、SulⅡ和/SulⅢ，具有简便快速、特异性强、灵敏度高等特点，与药敏试验、测序等实验方法的鉴定结果相比，符合率达100％。因此，本发明为常见的磺胺类耐药基因的检测提供了简便、高通量的检测试剂盒和检测体系，更符合实际的需要。本发明研究从基因上了解广西地区细菌对磺胺类抗生素的耐药情况，为调查耐药基因流行趋势提供一种全新的技术手段，应用前景广阔。

抗生素的发明和应用是人类在20世纪医药领域最伟大的成就之一。由于广谱抗菌药的滥用，细菌耐药性的产生，给人类又造成了新的灾难。随着动物养殖业向规模化、集约化方法发展，饲养密度提高，加上管理用药不合理，导致动物细菌性疾病的危害加重。动物源食品也随之受到污染。近年来，由食源性致病菌引起的食物中毒在世界各地均有报道，引发公共卫生安全问题。细菌耐药性是微生物对抗生素的一种自然反应，每一种抗生素进入临床用药后随之而来的是细菌的耐药，这种耐药可能是天然的，也可能通过变异或者基因转移获得，不同的抗生素有其主导的耐药机制。细菌耐药带来的问题日愈严重，随着分子生物学技术的发展，细菌耐药性相关耐药基因陆续被鉴定。因此，要控制细菌耐药性，不仅要合理使用抗生素，还应该建立细菌耐药性相关耐药基因监测网，准确系统连续地检测本地细菌耐药情况，从而做好耐药趋势的追踪和控制。

细菌耐药性监测技术的发展对于控制细菌耐药性十分重要。常规的细菌耐药性检测方法有K‑B法(药敏纸片扩散法)，MIC法(最小抑菌浓度法)和E‑test法等，这些方法对细菌耐药性的检测有很重要的作用。然而，这些传统方法耗时长，操作繁琐，灵敏度低，而且只能检测耐药表型不能检测耐药基因的流行规律，不能从根本上指导临床用药。因此，急需建立一种高通量、快速、灵敏又能同时检测耐药表型和基因型的检测方法，以达到监测和控制细菌耐药趋势的目的。

结合GeXP多重基因表达系统，发明人设计并合成了同时鉴别磺胺类抗生素耐药基因的GeXP多重PCR检测引物组，包括三对引物对：引物对A、引物对B和引物对C，它们分别针对磺胺类抗生素耐药基因SulⅠ、SulⅡ和SulⅢ；每对引物包括上游引物和下游引物，每条引物由特异性嵌合引物在5’端添加相应GeXP通用引物构成；特异性嵌合引物分别具有序列表中SEQ.ID.NO.7至SEQ.ID.NO.12的碱基序列。在此基础上，发明人进一步建立了相应GeXP快速检测方法及其试剂盒。实验证明，使用本发明可同时检测磺胺类耐药基因SulⅠ、SulⅡ和/SulⅢ，具有简便快速、特异性强、灵敏度高等特点，其灵敏度分别为10拷贝/μl、100拷贝/μl、10拷贝/μl，与药敏试验、测序等实验方法的鉴定结果相比，符合率达100％。因此，本发明为常见的磺胺类耐药基因的检测提供了简便、高通量的检测试剂盒和检测体系，更符合实际的需要。本发明研究从基因上了解广西地区细菌对磺胺类抗生素的耐药情况，为调查耐药基因流行趋势提供一种全新的技术手段，应用前景广阔。