生物、医药和医疗器械技术

本发明涉及一种负载重组人松弛素‑2的可吸入多孔微球及其制备方法，属于生物医药技术领域。制备方法的步骤为：（1）将重组人松弛素‑2溶解在含有牛血清白蛋白的PBS中，作为内部水相，将载体材料酯封端聚乳酸共聚物OH‑PLGA75/25‑COOR溶解在二氯甲烷中，作为油相；制备W1/O乳液；（2）将步骤（1）获得的W1/O乳液注入PVA溶液中，制备负载RLX的无孔微球（RLX@SMs）；（3）将步骤（2）中获得的RLX@SMs再采用程序降温法制备负载重组人松弛素‑2的多孔微球。本发明获得的RLX@PMs具有较大的几何直径，可以长期释放药物，且其空气动力学直径较小，有利于在肺部深部的高沉积。

特发性肺纤维化（IPF）导致肺功能恶化，目前还没有针对该疾病病因的有效治疗方法。重组人松弛素‑2（RLX）是20世纪初发现的在孕期分娩前大量分泌的对产道有松弛作用的多肽类激素，可在多种组织器官内起到扩张血管、诱导细胞外基质降解以及逆转成纤维细胞激活的作用，从而抑制纤维化发展，是一种很有前途的抗结构重塑和抗肺纤维化的生物治疗候选药物。然而，由于其为蛋白多肽类药物，血液循环半衰期极短（约10分钟），经静脉注射后极少能到达靶器官发挥药效，要达到最佳疗效需要持续输液或重复注射。

本发明与现有技术相比具有以下优点：（1）本发明所采用的复乳化法结合梯度冷却技术是制备负载蛋白多肽类药物的多孔微球的一种简便、超快、成本低、环保的方法，这种方法可以避免使用致孔剂，从而避免在多孔微球的工业生产过程中致孔剂的残留问题所致的安全隐患。本发明获得的可吸入多孔微球具有较大的几何直径，粒径大小为8‑10μm，作为RLX的药物储库，可以长期释放药物；由于其多孔结构，空气动力学直径较小，有利于在肺部深部的高沉积，且具有优良的蛋白负载效率，其中载药量为0.89±0.22%，包封效率为82.23±3.75%。颗粒密度和孔隙率分别为‑30.199±0.041 g·cm 和95.0±0.8%，低密度与高孔隙率有利于微球吸入给药后的肺部沉积。

（2）体外药物释放显示了多孔微球中负载的药物的释放时间可长达24天以上，且没有出现明显的初始爆发性释放。而多孔微球在肺部的生物分布显示其缓释作用至少持续了1.5个月，且由于多孔微球的实际密度小，可导致很多微球进入肺深部组织，达到于靶部位的更多比例的有效沉积。相较于无载体保护的游离药物，其不会从肺部迅速消除，而无孔微球大多沉积于胃部而不是呼吸道。

（3）在博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠模型中，组织病理学分析显示RLX@PMs在单次吸入后缓解了小鼠肺部组织胶原蛋白过度沉积、结构扭曲和顺应性下降等影响。对各组小鼠的吸入RLX@PMs可显著增强博来霉素诱导的肺损伤后的肺功能恢复，并可改善肺功能，从而提高生存周期。此外，RLX@PMs显示出比频繁灌服吡非尼酮更好的安全性。因此，RLX以多孔微球为载体于肺深处缓慢释放在有效治疗肺部纤维化方面极具潜力。