生物、医药和医疗器械技术

本发明涉及一种布舍瑞林的制备方法，该方法包括采用固相合成法制备Fmoc-Pro-CTC树脂；使用偶联剂偶联保护氨基酸；布舍瑞林-CTC树脂裂解；乙胺化、氢化、脱保护与纯化等步骤。与现有技术的纯液相合成工艺相比，本发明合成方法操作简便、中间体不用纯化，后处理容易，总收率达到31％。本发明中常压催化氢化反应脱保护中用甲酸铵替代氢气，在常温条件下反应，操作简便安全；此外，本发明使用三氟乙酸作为切肽试剂，避免使用剧毒的氢氟酸，所用原料钯碳可以回收再利用，这些都有利于减小环境污染。本发明工艺具有成本低、操作简便，反应条件温和，环境污染小，易于实现产业化生产等优点。

技术亮点

本发明是通过下述技术方案实现的。本发明涉及一种布舍瑞林的制备方法。该制备方法的步骤如下：A、采用固相合成法，在N,N-二异丙基乙胺存在的条件下由Fmoc-Pro-OH和取代度0.6～1.3mmol/g的CTC树脂得到取代度0.4～0.9mmol/g的Fmoc-Pro-CTC树脂；其中CTC树脂与N,N-二异丙基乙胺的摩尔比为1：3～9；B、将步骤A得到的Fmoc-Pro-CTC树脂在除去Fmoc后，以与步骤A同样的方式，按照肽序列Pyr-His(Trt)-Trp-Ser-Tyr(Bzl)-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro-OH使用偶联剂逐步偶联保护氨基酸，得到布舍瑞林-CTC树脂，所述保护氨基酸是指N端采用Fmoc保护的氨基酸；C、在以体积计0.5～3.5％三氟乙酸在二氯甲烷中的溶液里将步骤B得到的布舍瑞林-CTC树脂进行裂解，得到全保护肽；D、步骤C得到的全保护肽经过乙胺化、氢化、脱保护与纯化步骤后得到所述的布舍瑞林。

布舍瑞林是一种人工合成的促黄体生成素释放激素(LH-RH)类似物，由9个氨基酸组成，它的分子结构与LH-RH的区别是将后者的6-位和10-位Gly残基替代为D-Ser(tBu)-OH和乙胺。LH-RH是由下丘脑分泌的十肽激素，能促进垂体合成并释放黄体生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)，激发青春期发育和调节生殖、生育及性激素产生。当外源性LH-RH或其类似物以生理脉冲频率(每90分钟一次)短期、小剂量给药时，对垂体性腺系统起促进作用，用于治疗性功能低下、不排卵、青春 期延缓；而以非生理脉冲频率长期、大剂量给药时，可抑制垂体分泌LH和FSH，导致性腺分泌激素能力下降，性器官萎缩，用于治疗一些激素依赖性疾病，如前列腺癌、子宫肌瘤、乳腺癌、子宫内膜异位症及青春期性早熟。布舍瑞林及其类似物具有很高的药用价值和广阔的市场前景，目前布舍瑞林已成为国际多肽药物市场的畅销产品之一。

布舍瑞林结构中含有乙胺基修饰，同时含有组氨酸、精氨酸、色氨酸、丝氨酸和叔丁基保护的D-丝氨酸，难以找到合适的保护和脱保护策略，合成难度大。CN101735308A采用的液相合成工艺中涉及到复杂的保护策略，导致操作复杂，不利于工业生产采用。US6897289使用的Fmoc-His(Mmt)-OH和Fmoc-Tyr(2-Cl-Trt)-OH价格昂贵，不易获得。CN102190709A使用的Rink和Sieber树脂价格昂贵，其中Tyr(tBu)、Ser(tBu)、D-Ser(tBu)、His(Trt)保护是如何实现选择性脱除的没有特别说明，从策略上也很难实现。CN103517915A提到的Fmoc-Pro-Wang树脂的制备和碱性条件下裂解实现乙酰化修饰，都极易引起Pro和His的消旋。CN103554229A使用价格昂贵的氨基钠和碘乙烷制备乙胺基-CTC树脂，工艺复杂，大大增加合成成本。

与现有技术相比，本发明具有下述有益效果：与现有技术的纯液相合成工艺10％～20％收率相比，本发明合成方法操作简便、中间体不用纯化，后处理容易，总收率达到31％，收率较高。与现有的固相合成法相比，本发明采用固相与液相相结合的方法，合成中不需使用价格较昂贵的Fmoc保护氨基酸如Fmoc-His(Mmt)-OH和Fmoc-Tyr(2-Cl-Trt)-OH等，所用CTC树脂较乙胺基-CTC树脂、Rink树脂和Sieber树脂价格低，因此合成成本较低。本发明中常压催化氢化反应脱保护中用甲酸铵替代氢气，在常温条件下反应，操作简便安全，是本发明的优点之一；此外，本发明使用三氟乙酸作为切肽试剂，避免使用剧毒的氢氟酸，所用原料钯碳可以回收再利用，这些都有利于减小环境污染。本发明工艺具有成本低、操作简便，反应条件温和，环境污染小，易于实现产业化生产等优点。