绿色化工技术

本发明公开了一种高产生木薯淀粉酶的草酸青霉工程菌及其应用。本发明提供的工程菌是将特异DNA分子通过同源重组取代草酸青霉基因组DNA中PoxPepA蛋白酶的编码基因得到的；特异DNA分子中具有特异表达盒，其中启动子为序列26第1至19位所示启动子pPoxEgCel5B，启动编码特异蛋白质的基因的表达；特异蛋白质自包括信号肽spPoxGA15A、生淀粉糖化酶；生淀粉糖化酶为序列26第20至635位所示蛋白质。本发明提供的工程菌，用于生产生木薯淀粉酶具有非常高的产量，可用于相关工业，具有重大的应用推广价值。

木薯淀粉酶是一种重要的工业用酶，广泛应用于淀粉深加工、纺织、造纸、酿造等领域。本发明涉及一种高产生木薯淀粉酶的草酸青霉工程菌及其应用，该工程菌通过基因工程技术改造草酸青霉，表达了高活性的木薯淀粉酶，并通过发酵过程进行生产。该方法具有生产效率高、成本低、易于控制等优点，在淀粉深加工等领域具有广泛的应用前景。

本发明还护具有所述特异DNA分子的特异重组质粒。所述重组质粒具体为将所述特异DNA分子插入pEASY-Blunt克隆载体的Sac I和Not I酶切位点之间，得到的重组质粒pEASY-Blunt-PoxGA15A。

本发明还保护以上任一所述工程菌或特异DNA分子或特异重组质粒在生产生木薯淀粉酶和/或生淀粉糖化酶中的应用。所述生淀粉糖化酶为如下(b1)或(b2)：(b1)序列表的序列26第1至635位氨基酸残基组成的蛋白质；(b2)序列表的序列26所示的蛋白质。

本发明提供的工程菌，可以通过发酵制备得到具有生木薯淀粉酶的粗酶液，可以直接作为生木薯淀粉酶使用，也可以与其它生木薯淀粉酶复配混合使用，也可用于纯酶制剂的制备。